Katalog No: DiaRD-MTB/Rıf

DiaRD-MTB/RİF direnç Rt-PCR kiti klinik örneklerde M. tuberculosis kompleks varlığı ve RİF direncini araştırmak için gerekli tüm bileşenleri bulundurmaktadır. M. tuberculosis kompleks suşlarında bulunan IS6110 geni içerisindeki 200 baz çiftlik bölgenin amplifikasyonunu sağlayan primerler ve çoğalmayı saptayacak florofor boya ve baskılayıcı ile işaretli molecular beacon prob bulunmaktadır. Rifampisin direnci dirençten sorumlu rpoB gendeki 81 bazlık bölgede yer alan mutasyonların tamamını kapsayacak wild-type diziye spesifik üç ayrı boya ile işaretli molecular beacon problarla belirlenmektedir. Örnekte M. tuberculosis bulunması halinde uygulanmakta olan amplifikasyon programı süresince ileri (forward) ve geri (reverse) primerler ile hedef bölge çoğaltılmaktadır.

Amplifikasyon programının bağlanma (anneling) aşamasında problar hedef bölgeye tutunmakta ve böylece baskılayıcıdan kurtulan florofor boya floresan vermektedir. Oluşan floresan sinyalleri amplifikasyon süresince toplanmakta ve amplifikasyon grafikleri halinde rapor edilmektedir. Rifampisin direnci bulunmayan suşlarda M. tuberculosis spesifik primer/prob, internal kontrol ve wild-type spesifik olarak tasarlanmış rpoB primer/prob kanalından pozitif sinyal alınmaktadır. Suş dirençli ise M. tuberculosis spesifik boya kanalı ve internal kontrol kanallarından pozitif sonuçlar alınırken wild-type spesifik olarak tasarlanmış primer/prob kanalından sinyal alınmayacak veya IS6110 kanalına göre en az 5 Ct (cycle threshold) daha geç ve RFU değeri en az 300 birim daha düşük sinyaller alınacaktır.

Kit kapsamında, olası PCR inhibitörlerin tespitini sağlamak için RNazP genine özgü primer/problar bulunmaktadır. Pozitif kontrol olarak M. tuberculosis H37Ra suşundan izole edilmiş 1.0x10e4 kopya/mL olan DNA, negatif kontrol olarak steril PCR kalitesinde su bulunmaktadır