Katalog No: DiaRD-qHCV

Hepatit C virus  başta kan yoluyla olmak üzere, cinsel temasla ve plasenta yolla bulaşarak karaciğeri etkileyen Hepatit C hastalığına neden olmaktadır.  DiaRD-HCV RT-qPCR kantitatif kiti Hepatit C hastalarının plazmasında HCV RNA yükünün  in vitro ortamda belirlenmesi amacıyla geliştirilmiş bir gerçek zamanlı reverse transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyon temelli (Real-time reverse transkripsiyon polymerase chain reaction:RT-qPCR) tanı kitidir. Kit içerisinde HCV genomunun 5’UTR (untranslated region=UTR)  içerisindeki 105 bazlık bölgenin amplifikasyonunu sağlayan primerler, çoğalmayı saptayacak TaqMan probu ve  RNA miktarını belirlemede kullanılan kantitasyon standartları bulunmaktadır. Örnekte HCV RNA bulunması halinde reverse transkripsiyon aşamasından sonra uygulanmakta olan amplifikasyon programı süresince ileri (forward) ve geri (reverse) primerler ile hedef bölge çoğaltılmaktadır. Amplifikasyon programının bağlanma (anneling) aşamasında TaqMan problar hedef bölgeye tutunmakta, uzama (ekstensiyon) aşamasında DNA polimeraz enziminin probu 5’ uçlarından kesmesiyle bu uca bağlanmış olan floresan boya probun 3’ucundaki baskılayıcıdan kurtularak floresan vermektedir. Oluşan floresan sinyalleri amplifikasyon süresince toplanmakta ve amplifikasyon grafikleri halinde rapor edilmektedir. Her çalışmada kullanılan kantitasyon standartları (KS1-KS4)’na ait IU/mL verileri ve bunlara karşılık gelen Ct  değerleri kullanılarak oluşturulan standard eğriden pozitif örneklerdeki HCV RNA yükü belirlenmektedir.

Kit Performans Değerleri

Kitin performans testleri Clinical Laboratory Improvement Amendments (CLIA) ve Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI) önerileri doğrultusunda gerçekleştirilmiştir.

Analitik duyarlılık/limit of detection (LOD):

RNA ekstraksiyonu içeren analitik duyarlılık (LOD değeri) 20.8 IU/mL (0.0208 IU/mL)

RNA ekstraksiyon aşaması içermeyen analitik duyarlılık (LOD değeri) 12.07 IU/mL (0.01207 IU/mL)

Analitik özgüllük

 kullanılacak olan primer ve probların kit kapsamında araştırılacak olan HCV dışındaki genetik olarak yakın mikroorganizmalarla çapraz reaksiyonlar verip vermediği in silico analizler ve laboratuvar artamında test edilmiş, hiçbir hatalı pozitiflik saptanmamıştır.

Kitin HCV genotiplerini (1A, 1B, 2, 3, 4, 5, 6) saptayabilme potansiyeli in silico analiz ve PCR çalışmalarıyla doğrulanmıştır.

Kitin Doğrusallık Aralığı

Kitin doğrusallık aralığı: <13 IU/ml->1.3x1010 IU/mL.

Kitin sağlamlığı (Robustness):

HCV negatif olan 100 plazma örneğinde kitin LOD değerinin 3 katı olacak şekilde kontrol RNA eklendi. Diarex RNA ekstraksiyon kiti ile RNA izolasyonu yapıldıktan sonra RT-qPCR çalışması yapıldı. Örneklerin tamamından pozitif sonuç alındı. Ayrıca 102 negatif plazma örneğinin 200 mL içerisine kantitasyonu 4.0x 104 IU/mL olan internal kontrol (İK) RNA’sından 12 mL eklenerek ekstraksiyon yapıldı. RT-qPCR çalışmalarından İK eklenmiş örneklerin yalnızca ikisinden negatif sonuç alınmıştır. Kitin sağlamlık oranı : >%99.

Tanısal etkinliği:

DiaRD HCV RT-qPCR kitinin klinik örnekler üzerindeki etkinlik çalışmaları Artus HCV RG PCR kiti ile test edilmiş ve hasta bilgileri anonim hale getirilmiş olan 99 plazma üzerinde değerlendirildi. Kitin özgüllüğü %100, duyarlılığı %97.87 olarak belirlendi.